只要你认为有理由，那么你随时都可以起诉，这是《民诉法》赋予所有人的诉讼权利。但是你的诉讼请求是否能够得到法院的支持，还需要看你的证据是否能证明你们夫妻感情确已破裂。
就拿你自己提供的两方面线索来分析，从男方赌博入手，你现在就需要拿出证据来证明，男方长期嗜赌而且屡教不改。从分居入手，你就需要有证据来证明你们是因为感情不和，导致分居两年以上。